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      您的微量分光光度計測蛋白有問題?大概率原因找到了

          微量分光光度計主要用于核酸及蛋白質的濃度測定和純度評估。然而,在實際應用中,經常會出現核酸較容易被準確測量,而蛋白質樣品的濃度測量偏差較大的情況。很多用戶也困惑于此,同樣是基于紫外吸收的檢測,為何兩種樣品的檢測性能會有差異呢?


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          坊間也時常出現一些說法:微量只能用于測核酸,而蛋白測不準。如果真是這樣的話,那么設備的使用率就會大打折扣了。傳聞是不可輕信的,我們還是需要了解原因,然后才能找出解決方案。

      先上一組數據看看

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          重復性和穩定性是評判設備性能的好方式,這三臺基礎型Nanophotometer? N50T機型在正確的操作下,對較低濃度和較高濃度樣品的測量,都能夠得到一致的結果,CV<0.4%。如果設備性能都如此,那前面所述的問題就不存在了。

      普遍問題:蛋白樣品表面張力的影響


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          蛋白質樣品,相較于核酸而言,更容易出現表面張力降低的情況。因此,如果你的微量分光光度計是采用樣品拉伸原理的,即形成液柱的方法,對于一些樣品而言,是難以進行測量的,這可能是造成測量準確性和重復性不好的大原因。



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      影響因素一:溫度和揮發



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          通常來說,液體的溫度升高,由于分子間引力減弱,表面張力會隨之降低。這也解釋了為何低溫保存的核酸樣品,張力較大,更易形成液柱。在夏天實驗環境較熱,或者制藥用戶的恒溫恒濕實驗室,溫度是相對較高的,張力會隨之下降。

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          等一下,不是有空調嗎?空調產生的氣流會大幅增加微量液體的揮發,暴露在空氣中的液柱易受到影響,對測量重復性影響較大。結果就是:房間熱易揮發,冷風吹也易揮發。

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      影響因素二:鹽

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          無機鹽作為一種非表面活性劑,具有水合作用,趨向于把水分子拖入水中,因此會增大表面張力,反之亦然。因此,脫鹽或低鹽的樣品,表面張力會降低,常見于蛋白純化的流程。例如在進行蛋白質結構分析或質譜分析時,樣品需經過脫鹽處理,這樣的樣品在進行濃度測量時,并不容易形成液柱。

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      影響因素三:表面活性劑

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          蛋白提取過程中經常使用的表面活性劑(清潔劑),如SDS、Triton X100,以及在發酵過程中加入的消泡劑等成份,會大幅降低樣品的表面張力(想想看,連維持泡沫的張力都沒有了),這些物質常會殘留在樣本中,難以完全去除。因此,在工藝過程中測量蛋白樣品,是一項挑戰。

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      影響因素四:固液接觸表面

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          當使用移液器將微量樣品加載到點樣臺后,會出現液體與固體的接觸表面,點樣臺表面的親水/疏水性質會影響液體的表面張力。因此,使用拉伸法的主流品牌微量分光光度計,點樣臺表面具有疏水性涂層,會增大液體的張力。但是,隨著使用損耗,涂層會逐漸消耗,需要定期使用試劑進行維護和再生。在正確的維護之后,這一影響因素也隨之消失,但也增加了維護成本,而大多數用戶并不知道這一點。

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      這么麻煩?我還測不測了!

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      我們換個思維,如果一臺微量分光光度計的測量原理,并不依賴于液體的表面張力呢?Implen就可以,采用樣品壓縮技術的Nanophotometer?檢測時無需形成液柱,而是將液滴壓縮為很薄的液膜。因此,無論核酸、蛋白,都可以使用Nanophotometer?輕松測量。而封閉式的檢測環境,也很好的保護了樣品免受揮發影響。

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          無論是純化蛋白、總蛋白、結合蛋白、還是肽段樣品,Nanophotometer?都有豐富的APP程序和方法學應用,以及我們的技術團隊提供的支持,使您在蛋白濃度測量中遇到的問題迎刃而解。

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